단백질 분리와 전기영동

소개글

전기영동을 이용한 단백질의 분리에 대한 실험 레포트(예비/결과)입니다.

목차

1. 제 목
2.. Introduction
3. SDS에 대해서
4. Acryl amide gel이 중합되어 polymer를 형성하는 원리
5. 전기영동 시 단백질의 분리 원리를 glycine, chloride ion 그리고 pH 수준에서 조사
6. 단백질 정량법 중 bicinchoninic acid assay에 대해 조사
7. 실험방법
8. 결 과
9. Discussion
10. Reference

본문내용

Introduction
Cell로부터 단백질을 추출하고 이를 SDS-PAGE방법으로 단백질을 분자량에 따라서 분리하여 확인한다.
SDS(Sodium Dodecyl Sulfate)
매우 효과적인 surfactant이므로 공업적으로 널리 유용된다. 생명과학 분야에서는 SDS-PAGE에 사용된다. SDS는 대부분의 단백질에 잘 결합하는데, 매 2개의 아미노산 중 하나 꼴로 단백질에 결합하게 되므로, 결합 양은 대체적으로 단백질의 몰질량에 비례한다.
결합된 SDS는 그 단백질에 알짜 음전하(net negative charge)를 부여하게 되고 그 크기는 단백질이 원래 가지고 있던 전하량을 무시할 수 있을 정도이다. 따라서 SDS가 부착된 단백질들은 모두 비슷한 charge to mass ratio를 가지게 된다.
또 한가지 SDS가 단백질에 부착되었을 때에는 단백질 고유의 3차 구조가 변하게 되어 대부분의 단백질은 비슷한 모양을 띠게 된다. 따라서 SDS 하에서의 전기영동을 했을 때에 오직 질량(mass) 크기의 대소에 의해서 단백질을 분리할 수 있게된다.
즉 작은 단백질들은 좀 더 빨리 이동하게 된다.
Acrylamide gel이 중합되어 polymer를 형성하는 원리
acryl amide로부터 쉽게 polymer를 형성하게 된다. Electron withdrawing group(EWG)인 amide를 가지고 있는 vinyl monomer 형태를 띠고 있기 때문에 염기성의 catalyst의 첨가에 의해서 쉽게 polymerization이 일어나게 된다.
전기영동 시 단백질의 분리 원리를 glycine, chloride ion 그리고 pH 수준에서 조사
전기장내에서의 이동능력(electrophoretic mobility)에 따라서 단백질들을 분리하는 기술이 전기영동이다. Polyacrylamide gel electophoresis의 약자인 PAGE는 acrylamide와 bis-acrylamide를 중합시켜 만든 gel을 통하여 전기영동을 하는 것을 말한다.

참고 자료

(1) Lehninger, Principles of Biochemistry, 4th ed. (p 98~99)
(2) http://en.wikipedia.org