Northern blotting와 Western blotting

*연*

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최초 등록일: 2010.12.30
최종 저작일: 2010.10; 4페이지/ 한컴오피스; 가격 1,500원

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Northern blotting와 Western blotting에 대해 알아봅시다

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1. 원리
조직에서 분리한 mRNA를 formaldehyde agarose gel에 전기영동하고 니트로셀룰로오스막에 이전 하여 80˚C로 고정한 다음 방사선 동위원소로 표식한 상보적인 DNA probe를 사용하 hybridization시켜 mRNA의 존재를 확인
RNA 추출 세포나 조직에서 → 전기영동 한천겔에서 크기별로 분류 → 흡착지 transfer nitrocellulose나 nylon 흡착지에 →보합결합 전령 RNA의 상보적인 DNA나 RNA 소식자로
→자가 방사기록 전령 RNA의 크기와 상대적인 량 측정
2. 용도
-Northern blotting은 전사된 전령 RNA의 크기와 양을 분석하는 것
-유전자 발현 유무 및 그 정도 분석
-유전자 조절 특성 규명
3. 방법
-RNA 추출
cesium chloride 원심분리법
① guanidinium thiocyanate로 세포 파괴
② cesium chloride 균질액에 올려 놓는다
RNA 부유밀도 : 1.8g/㎖이므로 cesium chloride층 통과
③ RNA 분리 : 분광광도계에서 순수분리 측정
-전기영동
추출된 RNA와 ethidium bromide를 혼합하여 전기영동
자외선 노출시 rRNA의 28S와 18S의 띠(2:1) 그리고 사이에 mRNA가 도말된 것처럼 나타난다
변성
전기영동 분리된 mRNA의 엉킨 것을 펴는 과정
gloxal/DMSO(dimethyl sulfoxide) : 처리후 직접 이전 가능
methyl mercuric hydroxide
formaldeyde : 가장 많이 사용
처리후 DEPC(diethyl pyrocarbonate)로 처리된 증류수로 세척하여 제거 후 이전
-이전

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