cell culture method

소개글

animal cell(HeLa cell, HEK 293T cell)을 transfection 시킨 뒤 confocal microscopy를 이용해 관찰하여 protein의 기능을 예상해볼 수 있는 subcellular localization을 알아보는 실험보고서

목차

1. abstract
2. introduction
3. material & method
4. result
5. discussion
6. reference

본문내용

Abstract
이번 실험은 animal cell(HeLa cell, HEK 293T cell)을 transfection 시킨 뒤 confocal microscopy를 이용해 관찰하여 protein의 기능을 예상해볼 수 있는 subcellular localization을 알아보는 실험이었다. golgi protein에 적색 형광을 나타내는 RFP를 tagging 시킨 vector와 알 수 없는 protein에 녹색형광을 나타내는 GFP를 tagging 시킨 vector를 HeLa cell과 HEK 293T cell에 transfection시켜 culture한 후 confocal microscope로 확인하여 colocalization을 알아보았다. HEK 293T cell의 경우 SV40 T antigen을 상시 발현하므로 이번 실험에 사용된 vector의 복제가 일어나 HeLa cell보다 더 많이 protein이 발현되었음을 볼 수 있었다. 또한 protein이 ER에서 golgi로 이동하는 것을 억제하는 brefeldin A를 처리하여 관찰한 결과 golgi marker protein에 tagging한 적색형광만이 감소하는 모습을 보였다. 이를 통해 알 수 없는 protein이 golgi가 아닐 수 있음을 생각해 볼 수 있다.
Introduction
HEK 293T cell은 human embryonic kidney 293 cell로 HEK 293, 293 cell, HEK cell 등으로 불린다. HEK 293T cell은 adenovirus DNA를 transformation하여 human embryonic kidney cell의 chromosome에 viral genome을 incoporation하여 제작한 cell line이다. 이 cell line은 배양이 쉽고 transfection이 잘 되어 cell biology 연구에서 오랫동안 널리 사용되어왔다. 또한 유전자 치료법을 위한 바이러스와 단백질을 생산에도 응용된다. HeLa cell은 사람의 자궁경부암 조직에서 얻어낸 cell line으로 현존하는 인체에서 유래한 조직배양주 중 가장 오래전에 분리한 것으로 세계각지의 연구실에서 배양되며 유지되고 있다. 사람의 파필로마바이러스의 암유전자를 DNA속에 갖는 암세포의 속성을 가지는 특성으로 많은 분자생물학 실험에서 사용 되고 있다.
transfection이란 외래의 DNA를 eukarayotic cell에 주입하는 것을 의미하는 것으로 외부 DNA를 cell에 넣어 다른 특징을 만드는

참고 자료

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