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RT PCR & Real time PCR

*보*
최초 등록일
2010.11.17
최종 저작일
2008.11
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소개글

RT PCR 과 Real time PCR에 대한 전반적인 이론과 실험방법, troubleshoting에 관한 ppt

목차

역전사-중합효소연쇄반응
Reverse Transcription
Downstream primer
Protocol of Reverse Transcription (cDNA)

본문내용

enzymes discovered by Temin and Baltimore in the early1960s
used by retroviruses (such as HIV) to catalyze synthesis of cDNA from viral RNA template
RNA dependent DNA polymerase
RNA  cDNA

이미 염기서열을 일부 알고 있는 유전자를 얻고자 할 때

구성 요소
Template DNA
한 쌍의 primer (upstream, downstream)
dNTP (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
Taq DNA polymerase

3단계 반응
1) DNA의 변성(denaturation) 94C
2) Primer의 결합(annealing) 50C∼65C
3) DNA의 합성(extension, polymerization) 72C

Cycle 보통 25∼35회 반복하면서 원하는 DNA 부분을 증폭

중합효소 연쇄반응이 이용되는 실험
1) Probe로 사용할 cloning된 이중가닥 DNA의 증폭
2) 적은 양의 mRNA로부터 특정 cDNA의 cloning
3) DNA sequencing , 유전자의 footprinting
4) 돌연변이 검사
5) 병인성 바이러스 및 박테리아 검출
6) 특정 부위에 돌연변이를 일으킨 유전자의 제조
(site directed mutagenesis)

참고 자료

없음
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