[분자생물학]How to Obtain a Clone of a Specific Gene

소개글

bacteria, yeast, plants and animals에 있는 다양한 vector에 대한 유전자 클로닝 과정에 대해 기본적인 방법론을 이해시킬수 있는 레포트입니다.
그래서 특정한 유전자 클로닝을 다방면에서 쉽게 분자생물학적으로 이해할 수 있습니다.

목차

1. The Problem of Selection
(1) There are two basic strategies for obtaining the clone you want
2. Direct Selection
(1) Marker rescue extends the scope of direct selection
(2) The scope and limitations of marker rescue
3. Identification of a Clone from a Gene Library
(1) Gene libraries
(2) Not all genes are expressed at the same time
(3) mRNA can be cloned as complementary DNA
4. Methods for clone identification
(1) Complementary nucleic acid strands hybridize to each other
(2) Colony and plaque hybridization probing
(3) Examples of the practical use of hybridization probing
(4) Identification methods based on detection of the translation product of the cloned gene


5. 참고 문헌

본문내용

1. The Problem of Selection
가장 간단한 생물체인 E. coli 조차도 수천개의 유전자를 가지고 있으며, 따라서 전체 세포의 DNA가 제한 효소로 처리되면 원하는 유전자를 가진 단편뿐만 아니라 다른 유전자를 가진 또 다른 많은 단편들이 생기게 될 것이다. Ligation 반응동안 개개의 단편을 선별할 수 없으며 서로 다른 DNA조각을 가진 수많은 재조합 DNA분자들이 생성될 것이다. 그 결과 형질전환과 plating한 후에 다양한 재조합 clone을 얻게 될 것이다.

(1) There are two basic strategies for obtaining the clone you want
원하는 clone을 얻을 수 있는 많은 방법들이 있지만, 모두 두 개의 범주로 나눌 수 있다.
1) Direct selection for desired gene
원하는 유전자를 가진 clone만 colony를 형성하도록 하는 방법
모든 선별은 plating 단계에서 수행됨.
2) Identification of the clone from a gene library
우선 shotgun cloning 실험을 통해 clone library를 만들고 난 후에 그 중에서 원하는 clone을 찾는 방법
※ clone library : 특정 생물체에 존재하는 유전자들을 모두 갖고 있는 clone들의 집합체
Direct selection은 신속하고 비교적 명확하기 때문에 선호되는 방법이다. 그러나 모든 유전자에 응용할 수는 없다. 그러므로 clone identification 기술이 매우 중요하며 특히 많은 생물체의 완전한 genomic library가 현재 유용하기 때문에 더욱 그렇다.

참고 자료

Gene Cloning & DNA Analysis An Introduction 5th Ed. by T.A Brown by alive p.158~180『Chapter 8』
유전자 클로닝과 DNA 분석 입문서 번역