미생물의 유전, 세균 내 외부 유전자의 도입과 세포 내에서의 운명

소개글

미생물의 유전, 세균 내 외부 유전자의 도입과 세포 내에서의 운명

목차

유전자 재조합 (Recombination)
Homologous Recombination
Transposon
형질 전환 (Transformation)
형질도입 (Transduction)
특수형질도입
접합 (Conjugation)
유전공학 (Genetic engineering)
유전자 재조합에 사용되는 효소
Replicon
Plasmid DNA의 분리 검출 방법 (mini-prep)
재조합 Plasmid 확인
Lamda phgage
Cosmid
DNA의 분리 및 확인
외래 유전자의 발현
유전자 CLONING 의 실제

본문내용

세균 내 외부 유전자의 도입과 세포 내에서의 운명
세균의 염색체 : haploid
유전자의 표현형이 그대로 발현됨 (우성 또는 열성의 특징이 나타나지 않음)
- 외부 유전자 도입시…

유전자 재조합 (Recombination)
- 하나 이상의 핵산 분자가 재배열되거나 결합되어 새로운 염기서열의 핵산 형성
Homologous recombination : 유사한 염기배열 사이에서 재조합이 일어나는 경우
일반 재조합 (generalized recombination)
- 감수분열 (meiosis)
- RecA
- 유전자 사이에 재조합이 일어날 확률은 유전자 사이의 거리에 비례함
- 원핵생물의 유전자 재조합은 수용체 세포 속으로 유전적으로 다른 공여체 DNA가
삽입된 경우 일어남 (형질전환, 형질도입, 접합의 경우)

특수부위 재조합 (site specific recombination)
- Bacteriophage lamda, Mu, Transposon

참고 자료

유전자 CLONING 의 실제

Interferon alpha를 발현하는 293 세포주를 제작하라…^^;

Interferon alpha 유전자 서열 검색 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)
mRNA 서열 확인
mRNA 확보  cDNA 합성 (reverse transcriptase)
Primer 제작 (restriction enzyme site 포함 – 단, mRNA 서열을 자르지 않는것)
PCR amplification (Taq DNA polymerase)
Cloning to t-vector  transformation to E.coli  mini-prep
Sequencing (polymerase)
Mammalian expression vector 선정
Enzyme cutting (t-vector+IFNa & expression vector) (restriction enzyme)
Ligation (ligase)  transformation to E.coli  mini prep
Sequencing and enzyme cutting to confirm
transfect 293 cells directly or make virus particle to transfect cells
selection of cells using selection marker (Geneticin or Hygromycin)
collect cells and lysis cells  western blot or ELISA to check IFNa protein