브래드포드 (Bradford) 단백질 정량법 실험 리포트

소개글

브래드포드 정량법 (Bradford method)을 이용한 단백질 정량법 실험 리포트.
분광광도법 (spectrophotometry) 및 기기 사용법.
BSA 표준곡선 산출.
흡등광점, 흡광도로 미지시료의 농도 산출 방법 등에 대한 리포트 입니다.
(자세한 것은 목차 참고)

목차

1. 실험목적

2. 원리 및 이론
1) Bradford method
2) Lowry method
3) Biuret test
4) 분광광도법의 원리
5) 분광광도계의 구조와 기능
6) 분광광도계를 이용한 정량분석

3. Method

4. Result
1) Bradford method의 표준곡선
2) 표준용액의 wavelength scan
3) 미지시료의 농도 계산

5. Discussion

6. Reference

본문내용

1. 실험목적
Bradford Method를 통하여 단백질의 양을 정량한다.
2. 원리 및 이론
1. 단백질의 정량법
1) Bradford method
산성용액에서 Coomassie brilliant blue 염료(그림 1)는 단백질의 arg, trp, tyr, his, phe에 결합하게 되고, 이로 인해 염료의 최대 흡광도는 465nm에서 595nm로 이동하게 된다. 따라서 595nm에서의 흡광도는 단백질의 농도와 비례하게 된다. 이 방법은 발색반응이 2분 이내에 완결되며 1시 방해성분으로 알려진 것은 Triton X-100과 황산도데실나트륨(SDS) 이다. Coomassie brilliant blue 염료 사용시 phosphoric acid, methanol의 혼합물로 된 것을 사용한다. 사용 전에 이 염료 시약을 증류수로 5배 희석하여 여과한 후 유리용기에 담아 실온에서 보관한다. 이 희석용액은 2주간 안정하다.
그림 1 Coomassie brilliant blue G-250
2) Lowry method



5. Discussion
표준용액의 농도에 대한 흡광도의 관계를 나타낸 선형회귀모형의 결정계수(R2)는 BSA 표준용액과 phosphorylase b 표준용액의 경우 각각 0.962, 0.995로 1에 근접한 값을 나타내었고 직선적으로 비례하는 농도-흡광도 관계를 보였다. 따라서 이 실험의 표준곡선(그림 5, 6)은 상당한 유의성을 가진다고 볼 수 있었다. 동일한 농도의 표준용액들을 두 번 만들어 두 차례에 걸쳐서 흡광도를 측정하여 그 평균값(표 3, 4)을 표준곡선 산출에 이용하였다. 각 측정과정에서의 오차 요인은 시료 제작 과정의 재현성의 차이, 큐벳의 오염 등이 있을 수 있다.
Bradford method에 이용되는 Coomassie brilliant blue 염료의 흡수 파장은 595nm이다. BSA와 phosphorylase b 표준용액의 wavelength

참고 자료

1. 한국생화학회, 실험생화학, pp53-64, pp197-206, 탐구당, 2004
2. 구자현 외 역, 의학생화학, pp65, 정문각, 2001
3. McMurry John, Organic Chemistry 7th Edition, pp1027-1039, Thompson Brooks/Cole, 2008