IEF (Isoelectric focusing) 실험보고서

목차

1. 실험이론
1) IEF의 원리
2) 각 solution의 reagent 역할
2. 실험재료
3. 실험결과 및 분석
4. 고찰
5. 참고문헌

본문내용

1. 실험이론
<1> IEF의 원리
모든 단백질들은 구성하고 있는 아미노산에 따라 질량과 pI값이 다르다. 따라서 이 두가지 요인을 이용하여 단백질 분리가 가능한데, pI를 이용하여 단백질을 펼치는 방법을 IEF라고 하며 질량을 이용하여 단백질을 펼치는 방법을 SDS-PAGE라고 한다. IEF는 Gel에 loading 가능한 단백질의 양이 적어서 spot을 찾더라도 분석이 불가능하고 재현성이 낮은 한계를 지니고 있다. 이것을 극복하기 위해 IPG를 이용하여 Gel에 loading할 수 있는 단백질의 양을 약 100배 증가시킨다. IEF의 방법은 단백질이 이동해 갈 때 gel의 음극쪽으로 갈수록 pH가 증가하도록 pH차이를 만들어 단백질들이 각자의 등전점과 다른 pH gel상에 있을 때는 전하를 띠게 되므로 양 또는 음극으로 이동하다가 각자의 등전점 위치에 이르게 되면 전하를 띠지 않게 되므로 그 자리에 멈추게 되어 단백질마다 하나의 띠를 형성하는 focusing현상이 일어난다. 이론적으로 pH차이는 양극쪽에 산을 가하고 전류를 통하면 proton이 음극쪽으로 이동해가므로 pH차이가 형성되나 이 때 형성된 pH차이는 불안정하여 단백질 분리에 사용할 수 없기 때문에 pH차이를 안정화시키기 위하여 ampholyte를 gel에 첨가한다. ampholyte 시약에는 등전점이 서로 다른 여러 종류의 물질들이 섞여 있기 때문에 전장에서 이들은 등전점의 차이에 따라 낮은 등전점을 갖는 것은 양극 쪽으로, 높은 등전점을 갖는 것은 음극 쪽으로 배열하여 안정된 pH 경사를 형성한다.

<2> 각 solution의 reagent 역할
①Urea
물과의 결합이 낮은 chaotrope로써 단백질의 소수성 부분을 만들어서 이온화 가능한 group이 용액에 노출되게 해서 더 soluble하게 하고, 그 단백질을 denaturation시킨다. neutral이므로 IEF도중 이동하지 않는다.

참고 자료

<1>식품효소공학, 이승철 외 2인, 신광출판사, p.54~63
<2>http://www.cheric.org/ippage/e/ipdata/2001/12/file
<3>http://life.kjist.ac.kr/Htm/Lab/Med/SubDir/Study