생물] plasmid DNA 추출 보고서

소개글

생물교육론 과제입니다.

목차

1. 서론
2. 실험목적
3. 실험재료
4. 실험방법
5. 결과
6. 논의
7. 고찰
8. 참고문헌

본문내용

3) Plasmid DNA Purification
⑤ 상징액을 DNA binding column tube로 옮기고 13,000rpm에서 1분간 원심 분리한다.
☞ DNA binding filter column을 통과하여 2.0㎖ collection tube로 re-assemble된다.
⑥ collection tube에 원심 분리된 용액을 버린 후 튜브를 다시 조립하여 Buffer Ⅳ에 700㎕를 DNA binding column tube에 넣고 13,000rpm으로 1분간 원심 분리한다.
☞ 이것은 염과 용해성 침전물을 제거한다. 80% ethanol에 씻겨나가는 plamid의 양은 무시해도 좋다.
⑦ collection tube에 모인 용액을 버리고 튜브를 다시 조립하여 다시 한 번 13,000rpm으로 1분간 원심 분리하여 남아있는 ethanol을 제거하여 건조시킨다. 아래에 원심 분리된 용액은 버린다.
⑧ 새 1.5㎖ 튜브로 DNA binding filter column을 이동시킨다.
⑨ Buffer Ⅴ 50~100㎕(70㎕)를 DNA binding filter column에 넣고 용출되도록 최소 1분 둔다.
⑩ plasmid DNA는 13,000rpm에서 1분간 원심 분리하여 용출시킨다.
☞ 만일 더 많은 양을 원한다면, 샘플을 두 번 응축시켜 농축 과정 후에 사용한다.

◆ 전기 영동으로 plasmid 추출 확인(Agarose gel electrophoresis)
① agarose gel 만들기: agarose를 TAE buffer에 녹인다.(1%)
② gel을 TAE buffer가 담긴 전기영동 장치에 넣는다.
③ gel의 각 홈에 size marker 40㎕을 포함하여 추출한 DNA 10㎕를 loading Dye와 혼합하여 loading한다.
※ loading buffer : 50% glycerol, 0.1% BPB
④ 장치에 뚜껑을 덮고 전원을 연결하여 전기영동을 시작한다. (100V, 25분)
⑤ gel을 꺼내어 EtBr 용액에 5분간 담가 염색한다.

참고 자료

http://biochemistry.yonsei.ac.kr/zboard/bbs/view.php?id=free&no=632