DNA sequencing 분석의 종류 및 원리

소개글

DNA sequencing 분석의 종류 및 원리 에 대한 리포트 입니다.

찾으시는 분께 도움이 됐으면 좋겠습니다.

목차

DNA sequencing 분석의 종류 및 원리
1.원리
1) Denaturation of template DNA
2) Annealing of the primer
3) Labeling reaction
4) Extension/termination reaction
5) Stop reaction과 전기영동
2. 종류
Sanger`s dideoxy (enzymatic) method
Automated DNA sequencing

본문내용

DNA sequencing 분석의 종류 및 원리

1.원리

DNA sequencing의 원리

Double strand plasmid DNA를 이용하여 DNA sequencing을 시행하는 경우 기본적으로 다음과 같은 과정으로 나눌 수 있다.

1) Denaturation of template DNA

Double strand DNA를 쓰는 경우 pH를 높여 주거나 열을 가하여 DNA를 변성시키고, 이 상태로 침전하는 과정을 말한다. Single strand DNA의 경우에는 이 과정이 필요없거나 간단하여 실험 결과가 훨씬 더 좋아지므로 DNA 분리나 cloning과정의 불편을 감수하고 이를 쓰는 실험자도 많다.

2) Annealing of the primer

Sanger 방법은 DNA를 합성하는 것이 기본인데, DNA polymerase의 기본 작용 조건은 template와 primer가 있어야 한다는 것이다. 따라서 template DNA 내에 일부 염기서열을 알고 있어야지만 primer를 합성하여 쓸 수 있는데, plasmid를 사용하는 경우 vector의 multiple cloning site 부근에 해당하는 primer를 쓸 수 있으므로 대단히 편리하다. 이 과정에서는 적당한 온도와 반응 조건에서 template와 primer가 결합하게 된다.

3) Labeling reaction

이 과정에서는 나중에 형성된 산물들이 모두 방사성 동위원소로 표지되어 X-ray 필름에 노출시 감광되어 눈으로 확인할 수 있게 하는 과정이다. 가능한 한 생성되는 모든 DNA 산물에 동위원소를 표지하기 위해서 DNA polymerase에 의한 DNA chain 합성과정에서 우선적으로 동위원소가 표지된 nucleotide가 들어갈 수 있도록 조건을 정해주고 있다.

4) Extension/termination reaction

참고 자료

없음