Competent Cell Preparation

소개글

CaCl2처리를 통해 박테리아의 세포가 외부의 DNA를 잘 받아들일 수 있는 competent한 상태를 만드는 실험보고서

목차

1. abstract
2. introduction
3. material & method
4. result
5. discussion
6. reference

본문내용

Abstract
이번 실험은 CaCl2처리를 통해 박테리아의 세포가 외부의 DNA를 잘 받아들일 수 있는 competent한 상태를 만드는 것이었다. 첫 번째 실험에서 배양했던 E.coli DH5α 1㎖를 따서 O.D 600값이 0.5정도가 될 때까지 배양한 배양액을 얼음에 두어 식히고 원심분리한 뒤 pellet을 얻었다. pellet을 CaCl2용액으로 suspension하고 30분간 얼음에 둔 후, 다시 원심분리해서 얻은 pellet으로 CaCl2용액과 Glycerol용액으로 다시 suspension하고 microtube에 분주한 뒤, 액체질소를 이용, 급랭시켜 보관하였다. 실험결과 competent cell은 만들어지지 않았고 따라서 효율은 0 colony/u, transformation efficiency는 0 cell/DNAug이 나오게 되었다.

Introduction
bacteria에 있어서 유전자 재조합(recombination)이 일어나게 되는 경우는 크게3가지로 나눌 수 있다. transduction은 바이러스를 통해 DNA fragment가 recipient cell에 침투되어 recombination이 일어나게 하는 방법이고, conjugation은 donor cell이 recipient cell과 물리적 접촉을 통하여 donor cell의 DNA fragment를 recipient cell에게 주어 recipient cell이 recombination을 하는 경우로 진핵생물의 유성생식과 비슷한 방법이다. bacteria의 transformation은 1944년 최초로 밝혀졌는데 이는 유전물질이 DNA라는 것을 최초로 증명한 연구이다. 이후 transformation은 유전자 교환과정의 한 시점에서 외부배지에 용해된 DNA에 의해 매개된 Prokaryote 사이의 유전자 교환을 설명하는데 사용하게 되었다. 이때 자연적으로 외부 DNA의 세포막투과를 용이하게 전달받을 수 있는 세포의 상태를 competence가 있다고 한다.

참고 자료

John M. Martinko, Brock Biology of Microorganisms 11th edition, Pearson Education International, 2007, p270
김창한 외 6인 공저, 일반미생물학, 유한문화사, 2000년, pp.292~293
Uldis N. Streips, Modern Microbiogenetics 2nd edition, Wiley Liss, 2002, pp.449~454