SDS-PAGE

소개글

SDS-PAGE

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion & Conclusion
6. Reference

본문내용

1. Abstract
저번 실험에서 추출한 당근의 단백질을 가지고 크기별로 분리하는 실험이다. 여러 종류의 단백질이 추출한 단백질 안에 들어있지만 SDS-PAGE를 이용하여 크기별로 분리해 내는 것이다. 이것은 western-blot과 연계되어서 우리가 원하는 단백질의 크기를 확인할 수 있고 전기영동의 어느 부분에 위치하였는지도 알 수 있다.
SDS-PAGE로 크기별로 분리해 이것을 polyacrylamide gel에 전기영동 시키면 단백질의 크기에 따라 band가 형성되는데 이 때 표준곡선을 작성하면 미리 알고 있는 크기가 아닌 미지의 단백질까지도 크기(MV, Molecular weight)를 추정할 수 있다. gel을 이동시킬 때에는 두 가지 성질의 gel을 이용하는데 stacking gel과 resolving gel을 이용한다. 이 두 gel은 pH의 차이에 따라 그 속에 함유된 Glycine의 전하가 바뀜으로써 이동 속도가 변하는 것을 이용한다. stacking에서는 단백질의 속도가 Cl-과 glycined의 중간이라서 잡혀있게 되지만 resolving에서는 pH가 바뀌고 glycine의 속도가 변하면서 단백질의 속도가 Cl-과 glycine보다 차이가 나므로 달릴 수 있게 되는 것이다.
단백질을 SDS-PAGE한 결과 여러 개의 band를 확인할 수 있었고 우리가 많이 다뤘던 HsP17.7의 대략적인 위치를 알 수 있었다. 하지만 임의로 지정된 band를 추세선식을 통하여 계산하는 과정은 다른 gel을 이용했다. 계산하여보니 그 위치에 있는 단백질은 대략 35.609 kDa, 10.782 kDa이 나왔다.
이렇게 분리된 단백질은 다음 실험인 Western blot을 위해 membrane에 transfer한다.

2. Introduction
SDS-PAGE를 통해 단백질을 molecular weight에 따라 분리한다. 그렇다면 이번 실험에서 쓰이는 SDD-PAGE의 원리를 알아보겠다.

참고 자료

① 분자생물학 2판 / Robert F. Weaver / 라이프사이언스 / 2003. 2
② http://www.genehunters.co.kr/Training/03_1.htm
③ http://www.elpisbio.com/sub/support/protocols/Protocols.htm