Taq polymerase 정제

소개글

Taq polymerase는 온천주변에서 자라는 미생물(thermophile)인 Thermuc aquaticus가 가지는 DNA polymerase로서 열에 안정하기 때문에 PCR에서 DNA를 증폭할 때 중요한 역할을 한다. 이번 실험에서는 INVIαF` E.coli를 이용하여 inducer IPTG로 Taq polymerase를 과발현시킨 후 cell lysis, precipitation 및 dialysis을 통해 Taq Polymerase를 정제했다. 정제된 Taq polymerase의 activity를 확인하기 위해 PCR을 수행하여 DNA template를 증폭했고, 증폭된 DNA를 확인하기 위해 DNA agarose gel electrophoresis을 했다. 3주간의 실험과정을 거쳐 Taq polymerase가 DNA를 증폭시킨 것을 확인할 수 있었고, genomic DNA PCR과 plasmid PCR을 수행하여 두 가지 방법의 차이도 알아보았다. 이번 실험을 통하여 central dogma도 확인해 볼 수 있었다.

3주간의 실험레포트

목차

Abstract:
Introduction:
Materials & Methods:
Result:
Discussion:
Reference:

본문내용

Abstract:
Taq polymerase는 온천주변에서 자라는 미생물(thermophile)인 Thermuc aquaticus가 가지는 DNA polymerase로서 열에 안정하기 때문에 PCR에서 DNA를 증폭할 때 중요한 역할을 한다. 이번 실험에서는 INVIαF` E.coli를 이용하여 inducer IPTG로 Taq polymerase를 과발현시킨 후 cell lysis, precipitation 및 dialysis을 통해 Taq Polymerase를 정제했다. 정제된 Taq polymerase의 activity를 확인하기 위해 PCR을 수행하여 DNA template를 증폭했고, 증폭된 DNA를 확인하기 위해 DNA agarose gel electrophoresis을 했다. 3주간의 실험과정을 거쳐 Taq polymerase가 DNA를 증폭시킨 것을 확인할 수 있었고, genomic DNA PCR과 plasmid PCR을 수행하여 두 가지 방법의 차이도 알아보았다. 이번 실험을 통하여 central dogma도 확인해 볼 수 있었다.
Introduction:
Step 1 : primer, dNTP, 내열성 DNA polymerase를 mixture로 만들고, 목적으로 하는 두가닥 DNA 단편을 denaturation 한다. (94℃, 30 sec)
Step 2 : 열변성에 의해 생긴 한가닥 주형 DNA에 primer를 annealing한다. (50℃, 30 sec)
Step 3 : DNA polymerase에 의한 상보성 DNA를 합성한다.(72℃, 1 min)
PCR(Polymerase Chain Reaction)은 Double strand DNA의 denaturation step, Primer와의 annealing step, Polymerase에 의한 DNA Synthesis step을 반복하여 실시함으로써 in vitro에서 DNA를 증폭하는 방법이다.

참고 자료

- 강병철, 세포학, 2000, 한우리, pp.105~114
- David L.Nelson, Lehninger Principle of Biochemistry 4th ED., 2005, W.H.Freeman and Company, pp.92~93