단백질 정량 (bradford법)

소개글

단백질 정량 (bradford법)

제가 세미나때 발표했던 내용입니다.

목차

실험목적

실험이론

단백질 정량이란?
단백질 정량 법의 선택 기준
Bradford법 원 리 등등...

시약 및 기재

실험방법

본문내용

목적
단백질 정량은 생화학의 가장 기본적인 실험중의 하나이다. 단백질 정량법은 다양하지만,
대부분의 실험에서 UV-Vis Spectrophotometer가 사용된다.
단백질에 발색제를 가하여 가시광선 영역의 흡광도를 측정하는 정량법인 Bradford법에
관하여 설명하고자 한다.

Bradford법
① 원 리
산성용액이서 Coomasie brilliant blue 염료는 단백질과 결합하게 되고, 이로 인해 염료의 최대 흡광도(λmax)는 465nm에서 595nm로 이동하게 된다. 따라서 595nm에서 흡광도는 단백질의 농도와 비례하게 된다. 이 방법은 발색반응이 2분 이내에 완결되며, 1시간까지 안정성이 유지된다.
Bradford 방법의 감도는 Lowry 방법보다 좋으며, 미량정량법(microassay)을 사용하면 1～20ug의 단백질량을 측정할 수 있다. Bradford 방법은 빠를 뿐만 아니라 비 단백질 성분들에 의한 방해도 거의 없다. 측정에 방해성분으로 알려진 것은 Triton X-100과 황산도데실나트륨(SDS)이다.

② 시약 및 기재
가. Bradford 염료 시약 - Coomassie Brilliant Blue G-250 dye, phosphoric acid, methanol의 혼합물로써 혼합된 용액을 구입하여 사용한다. 사용 전에 이 염료 시약을 증류수로 5배 희석하여 여과한 후 유리용기에 담아 실온에서 보관한다. 이 희석용액은 2주간 안정하다.

참고 자료

전공서적