전기영동의 원리와 특징

*진*

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SDS-PAGE, 2D-PAGE, Agarose gel 전기영동의 특징에 대해서 설명

본문내용

1. 전기영동의 원리
• 전기장 안에서 하전된 입자(이온)가 양극 또는 음극 쪽으로 이동하는 현상을 이용한 방법
• 이동속도에 영향을 미치는 요소
- 입자의 전하량, 입자의 크기와 모양, 용액의 PH, 용액의 점섬도
- 전해질 종류와 이온의 세기

2. 전기영동의 종류 및 특징
• Agarose gel 전기영동
- 특징
① DNA 분자의 크기가 클수록 느리게 이동함.
② Agarose의 농도가 높을수록 느리게 이동함.
③ DNA 형태(구조)에 따라 이동속도가 다름.
※ supercoiled DNA가 가장 빨리, 그 다음 linear DNA, open circular DNA의 순으로
이동한다.
④ 부하되는 전압이 높을수록 이동속도가 빠름
⑤ 전기장의 방향도 이동속도에 영향을 미침
⑥ Ethidium bromide는 DNA 이동속도를 15% 정도 감소시킴
⑦ 전기영동 완충용액의 성분과 이온강도도 전기영동 속도에 영향을 줌
※ 여러 DNA 형태를 알아내기 위한 확실한 방법은 ethidium bromide의 양을 증가시켜 전기영동을 시행하는 것이다. Ethidium bromide의 농도가 증가하면 더 많은 ethidium bromide가 DNA와 결합하게 된다. Supercoiled DNA에서 negative superhelical turn은 차차 제거되고 반지름이 증가하게 되어 이동속도는 느려지게 된다. Superhelical turn이 남아있지 않은 적절한 색소의 농도에서 이동속도는 가장 느리다. 여기에 더 많은 ethidium bromide가 첨가되면 positive superhelical turn이 생기게 되고 DNA 분자는 더 치밀해지며 이동속도는 급속도로 빨라진다. Linear와 open circular DNA의 이동은 DNA가 중성의 전하를 띠거나 ethidium bromide에 의해 굳어지는 경우에 이동속도가 느려진다

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