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Identification of serum glycoproteins by SDS-PAGE and Western blotting : 예비보고서

*승*
최초 등록일
2009.05.01
최종 저작일
2005.10
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소개글

생화학실험 중 하나인 Identification of serum glycoproteins by SDS-PAGE and Western blotting에 대한 예비보고서입니다.

목차

1. 제목

2. 실험목적

3. Introduction

4. Content & Theory
⑴Western blotting
⑵Detection of Blotted proteins

5. 시약과 초자
⑴SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis
⑵Blotting and Detection

6. 실험과정
⑴Procedure for SDS-PAGE
⑵Procedure for blotting and detection

7. Reference

본문내용

1. 제목 : Identification of serum glycoproteins by SDS-PAGE and Western blotting
2. 실험목적 : bovine serum을 SDS-PAGE로서 나누고 nitrocellulose membrane으로 protein들을 blotting하여, lectin concanavalin A과의 interactin을 통해 serum glycoprotein을 identify한다.
3. Introduction
⑴SDS-PAGE는 protein의 분석 tool-분자량 측정, protein mixture fractionation, 순도의 측정-로서 매우 효과적이다. 그러나 이것은 protein band의 identification에 대한 어떠한 정보도 제공하지 않는다. 위치만 알려줄 뿐이다.
⑵이들 protein들은 특별한 reagent들과의 반응으로 identify될 수 있는데, 이를 위해서는 polyacrylamide gel에서 protein들은 분리되어야 한다. 주로 nitrocellulose membrane(움직이지 않는 단백질과 강한 결합을 이룸)으로 blot되는데, 이를 Western blotting이라 한다.

4. Content & Theory
⑴Western blotting
①Western blotting를 하기 위해서는 protein들은 일단 PAGE에 의해 분류되어야 한다. denaturing의 이점 때문에 SDS-PAGE가 선호된다.
②transfer를 위한 membrane은 크게 3가지(nitrocellulose, nylon, polyvinyl-difluoride)가 있는데, 이중 nitrocellulose가 주로 쓰인다.
=>nitrocellulose는 만족할만한 단백질 결합력을 보이나, 분자량이 14000보다 작은 단백질과는 약하게 결합한다. 결합시 공유결합성 결합이 아닌 소수성 결합을 한다.

참고 자료

- Modern Experimental Biochemistry, 3rd ed., Rodney Boyer.
- Merck index, 12th ed., CambridgeSoft.

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