Plasmid DNA isolation and characterization by electrophoresis - 결과보고서

소개글

생화학실험 중 하나인 Plasmid DNA isolation and characterization by electrophoresis에 대한 결과보고서입니다.

목차

1. Introduction
⑴실험 제목
⑵실험 목적
⑶배경지식 - plasmids
⑷실험 상의 개요 - Isolation of plasmid DNA - Microscale alkaline lysis method

2. Materials & Procedure
⑴시약 및 초자
⑵실험 과정

3. Result
⑴Electrophoresis를 실행한 결과 나타난 DNA ladder
⑵DNA 뽑은 결과물의 농도 - Absorbance
⑶DNA ladder들에 대한 설명

4. Discussion
⑴각각의 시약의 역할
①STET buffer(0.05M glucose, 0.01M EDTA, 0.025M Tris-HCl, pH 8.0)
②NaOH
③SDS
④Potassium acetate
⑤EtOH

⑵Electrophoresis의 결과에서 알 수 있는 사실
⑶pcDNA3.1(+)의 properties
⑷electrophoresis가 끝난 뒤의 현상

5. Problem 풀이
⑴[14-7] glycerol과 bromophenol blue dye를 gel-loading buffer에 넣는 이유?
⑵[14-8]polyacrylamide electrophoresis가 대부분의 plasmid DNA에 적당하지 않은 이유는?
⑶[14-9]bromophenol blue dye와 plasmid DNA의 상대적인 electrophoretic mobility에 적용되는 가정은 무엇인가?
⑷[14-10]ethidium bromide가 gel electrophoresis에서 사용되는 이유는 무엇인가?

6. 참고문헌

본문내용

1. Introduction
⑴실험 제목 : Plasmid DNA isolation and characterization by electrophoresis
⑵실험 목적 : 이 실험은 학생들에게 microorganism에서의 DNA를 isolation하고 partial
purification하는 일반적인 방법을 소개한다.
⑶배경지식 - plasmids

.. 중략 ..

2. Materials & Procedure
⑴시약 및 초자
- E.Coli (must contain any vector)
- LB (antibiotics를 가지고 있는 LB)
- STET buffer (0.05M glucose, 0.01M EDTA, 0.025M Tris-HCl, pH 8.0) + lysozyme 1mg/㎖
- Alkaline - SDS solution (0.2N NaOH, 1% SDS)
- 5M potassium acetate
- TE (pH 8.0)
- EtOH (100%, 70%의 농도를 가진 에탄올이 쓰인다)
- Agarose gel electrophoresis : precast agarose plates, ethidium bromide solution, electrophoresis buffer, gel-loading buffer, electrophoresis chamber, power supply, UV lamp, DNA molecular marker(DNA ladder : 50~3000bp 사이)

⑵실험 과정
①1.5ml cultured soap를 튜브에 옮긴다.
=>cell harvest의 과정이다.
②2분동안 centrifuge한 뒤, 피펫으로 supernatant를 제거한다.

참고 자료

*Modern Experimental Biochemistry, 3th ed., Rodney Boyer.
*Merck index, 12th ed., CambridgeSoft.
*Biochemistry, 5th ed., Berg, Tymoczko, Stryer, Freeman publishing.
*https://catalog.invitrogen.com/index.cfm?fuseaction=viewCatalog.viewProductDetails&productDescription=5096
*http://images.google.co.kr/images?q=supercoil+&svnum=10&hl=ko&lr=&newwindow=1&start=0&sa=N
*http://www.madsci.org/posts/archives/feb99/919869466.Mb.r.html
*http://www.izotop.hu/newprods.htm
*http://www.promega.com/enotes/faqspeak/0003/fq0019.htm
*http://biotech.biology.arizona.edu/labs/Electrophoresis_dyes_stude.html